稳定过表达CXCR2受体的HEK-293细胞株的构建以及活性鉴定

张洁¹ 任广明² 马文兵² 葛志强¹ 詹轶群² 尹荣华²* 杨晓明^1,2*

(¹天津大学化工学院, 天津 300072; ²中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生命组学研究所, 北京 102206)

摘要 :

CXC趋化因子受体2(the CXC chemokine receptor 2, CXCR2)介导的中性粒细胞趋化在细菌感染、慢性炎症、肿瘤发生发展过程中发挥着至关重要的作用, 但是目前对于CXCR2受体及下游信号的调控并未被完全揭示。该研究首先以Flag-CXCR2-Tango质粒为模板设计Flag-CXCR2的特异性引物, PCR扩增后将其连接至pCDH-MCS-T2A-Neo-MSCV慢病毒表达载体上, 随后对阳性克隆进行测序及表达验证。接着在HEK-293T细胞中包装过表达Flag-CXCR2的慢病毒颗粒并感染HEK-293细胞, 使用遗传霉素筛选后, 蛋白质免疫印迹和免疫荧光检测发现, Flag-CXCR2稳定表达在HEK-293细胞膜上。最后利用白细胞介素-8(interleukin-8, IL-8)刺激过表达Flag-CXCR2的细胞株, 检测发现CXCR2下游信号通路活化及F-actin组装。