人皮肤成纤维细胞和脐带间充质干细胞分泌蛋白差异比较研究

段婧¹ 王琰¹ 王伟¹ 芦现杰¹ 刘延明¹ 王晓兵² 庞保军³ 韩发彬^1,4*

(¹聊城市人民医院/聊城大学组织工程与再生医学研究所, 聊城 252000; ²聊城市人民医院/聊城大学妇产科, 聊城 252000; ³聊城市人民医院检验科, 聊城 252000; ⁴山东大学第二医院转化医学研究所, 济南 250013)

摘要 :

该文探讨人皮肤成纤维细胞(NCF)和脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)分泌蛋白的差异, 从而初步阐明脐带间充质干细胞分泌蛋白对于治疗退行性疾病的可能分子机理。基于串联质谱(LC-MS/MS)的方法, 收集用无血清培养基培养48 h的NCF和hUC-MSCs上清样品, 进行TMT(tandem mass tags for relative and absolute quantitation)检测, 从而对蛋白质酶解之后的肽段进行同位素标记, 之后对分泌蛋白的表达差异进行精确的鉴定和定量。通过生物信息学分析, 建立NCF和hUC-MSCs分泌蛋白谱图, 并通过GO(gene ontology)对这些分泌蛋白进行功能分析, 对于在蛋白分子互作图中处于中心位置的CCL2、COL4A1、TGFβ1、SERPINE1、SEMA7A我们进行了Real-time PCR定量分析。通过TMT以及生物信息学分析, 该文鉴定出1 000多种共有蛋白, 其中有704种蛋白在hUC-MSCs中的表达量比NCF中高。通过Real-time PCR, 我们证实了CCL2、COL4A1在hUC-MSCs中的分泌量的确高于其在NCF中的分泌量, 且差异具有显著性。通过检索文献以及Uniprot的相应数据库数据, 该文发现, 这两种分子在炎症的消除方面起到十分重要的作用,而炎症反应在帕金森病等退行性疾病的发生与发展过程中起到重要作用。通过对NCF和hUC-MSCs培养基中分泌的蛋白进行检测分析, 该研究为探讨脐带间充质干细胞分泌蛋白治疗神经退行性疾病的可能分子机制提供启示。