首页 > 过刊浏览 > 第42卷, 第6 期

肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)单克隆抗体制备及检测方法的建立


管楷丽1  朱华结2*  程华3*

(1河北大学药学院, 保定 071002; 2河北省药物化学与分子诊断教育部重点实验室, 保定 071002; 3河北省科学院生物研究所, 石家庄 050000)
摘要 :

该文通过制备出特异性高的单克隆抗体, 初步建立了双抗夹心ELISA定量测定CK-MB的方法, 为CK-MB试剂和原料的国产化奠定重要的基础。以购入的CK-MB抗原为免疫原, 对随机选取的5只6~8周龄Balb/c健康雌性小鼠进行免疫。采用有限稀释法、间接ELISA、捕获ELISA方法, 最终筛选出了3株能够稳定分泌抗体的细胞株, 分别命名为2F6、2H3和2H9, 其分泌的单克隆抗体亚型均为IgG3, 腹水效价分别为1׃102 000、1׃51 200和1׃102 000。采用亲和层析法对3株杂交瘤细胞产生的小鼠腹水进行纯化, 分光光度计测定纯化后的单克隆抗体2H3、2F6、2H9的浓度分别为5 mg/mL、6 mg/mL、6 mg/mL, SDS-PAGE结果表明, 成功纯化了单抗腹水, 能够清晰地观察到轻链和重链两条带。Western blot结果表明, 单克隆抗体2F6、2H3和2H9均能特异性识别CK-MB蛋白。间接ELISA及捕获ELISA方法检测显示, 单克隆抗体2H3只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应; 单克隆抗体2H9只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应; 单克隆抗体2F6只与CK-MB及CK-MM发生捕获ELISA方法反应。稳定性实验表明, 3株杂交瘤细胞都能稳定分泌抗CK-MB单克隆抗体。高质量单克隆抗体的获得, 为建立CK-MB检测方法奠定了基础。