MITF在葡萄膜黑色素瘤细胞中的功能研究

该研究首先通过qRT-PCR和Western blot发现, MITF在人葡萄膜黑色素瘤细胞中的RNA水平及蛋白水平都显著高于葡萄膜黑色素细胞中的水平。通过RNA干扰技术下调葡萄膜黑色素瘤细胞中的MITF的表达, 采用MTS实验、细胞平板克隆实验发现, MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖能力被显著抑制。利用流式细胞术及Hoechst染色、Caspase 3/7活性检测发现其细胞周期受到阻滞, 且凋亡水平增加。通过RTCA xCELLigence DP检测系统定量检测发现, si-MITF能抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的迁移及侵袭能力。Western blot检测发现, MITF下调后葡萄膜黑色素瘤细胞中细胞周期相关蛋白p-Rb(retinoblastoma)、CDK2(cyclin-dependent kinase 2)、CDK6、细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)以及CyclinE2的表达水平下调, 与增殖及迁移侵袭密切相关的FAK(focal adhesion kinase)及ERK(extracellular signal-regulated protein kinases)蛋白的磷酸化水平降低。该研究表明, 在葡萄膜黑色素瘤细胞中下调MITF的表达后, 细胞内部分周期相关蛋白、细胞增殖及迁移侵袭相关蛋白的表达均有下调, 导致细胞发生G1期阻滞, 使细胞的增殖、迁移及侵袭能力受到抑制, 同时也促使细胞发生凋亡。