miR-199b-3p通过靶向PLCε抑制前列腺癌细胞的恶性增殖

郑永波¹ 刘佳渝¹ 段李梅² 杨锦潇² 罗春丽² 吴小候^1*

(¹重庆医科大学附属第一医院泌尿外科, 重庆 400016; ²重庆医科大学检验医学院, 临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆 400016)

摘要 :

该研究的目的是确定miR-199b-3p在前列腺癌(PCa)中的表达及其对PCa细胞增殖的影响及作用机制。通过实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-199b-3p在PCa组织、良性前列腺增生(BPH)组织、PCa细胞及人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中的表达, 并分析其表达与PCa临床病理特征的关系。蛋白质印迹法(Western blot)用于检测磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(PLCε)的表达。采用CCK-8法和克隆形成实验对其体外增殖进行评估。Edu测定法用于检测细胞对Edu的吸收。荧光素酶报告实验被用来验证miR-199b-3p和PLCε的靶向结合情况。结果显示, 在PCa组织中miR-199b-3p的表达水平明显低于BPH组织, 且与临床病理特征中的组织学分期相关。上调miR-199b-3p可以显著抑制PCa细胞的增殖和Edu的摄取能力, PLCε被鉴定为miR-199b-3p的下游靶基因, 且其表达量与miR-199b-3p的表达量呈负相关。此外, 补救实验结果显示, 上调PLCε能够逆转miR-199b-3p在PCa细胞增殖中的抑制作用。总之, miR-199b-3p可通过靶向PLCε 3ʹ非编码区(3ʹ-UTR)负性调控PLCε进而抑制PCa细胞的恶性增殖。