Tim-3对宫颈癌细胞侵袭迁移的影响及机制研究

该文主要研究慢病毒介导的T细胞免疫球蛋白黏液素3(T-cell immunoglobulin mucin-3, Tim-3)对宫颈癌细胞的促肿瘤作用及其相关作用机制。首先, 采用PCR方法获取Tim-3片段, 将其克隆入pCDH载体中, 并通过酶切和测序进行鉴定; 将三个表达载体, 即重组阳性表达载体(pCDH-Tim-3)、空载体(pCDH-NC)和绿色荧光蛋白载体(pCDH-GFP), 分别与psPAX2和pMD2.G共转染至293T细胞中, 最后形成相应的慢病毒组。然后, 将三组慢病毒分别感染HeLa细胞, 获得稳定细胞株(HeLa-Tim-3、HeLa-NC、HeLa-GFP), 其中设置HeLa-NC为空载病毒阴性对照组; 最后, 通过观察HeLa-GFP组, 初步获取慢病毒感染效率; 运用流式细胞术、Western blot和细胞免疫荧光检测Tim-3的相对表达水平; 细胞划痕和Transwell检测细胞的迁移及侵袭能力; Western blot检测上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Snail)的表达变化; 流式细胞术检测细胞凋亡率变化。该文成功构建了pCDH-Tim-3慢病毒表达载体并将其包装成慢病毒, 获得对应的稳定细胞株; 在HeLa-GFP中可以观察到大量的绿色荧光; 与HeLa-NC组相比, Western blot、流式细胞术和细胞免疫荧光检测结果均表明, He-La-Tim-3组的Tim-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05); 细胞划痕实验和Transwell检测结果均表明, HeLa-Tim-3组的迁移侵袭能力明显提高(P<0.01); 另外, Western blot检测结果表明, 与HeLa-NC组相比, HeLa-Tim-3组N-cadherin和Snail显著增多但E-cadherin明显减少(P<0.05), 而流式细胞术检测结果表明, HeLa-Tim-3组凋亡率显著减少(P<0.001)。因此, 高表达Tim-3宫颈癌细胞可以通过EMT转化和抑制细胞凋亡等相关作用机制来加强肿瘤的恶性进展。