牛肝干细胞的分离培养与鉴定

该实验旨在分离牛肝干细胞, 培养观察其生长特性, 为比较医学研究及开发牛肝脏体外研究工具提供实验基础。实验采用改良的离体两步胶原酶灌流法, 结合密度梯度离心分离牛肝干细胞, 观察细胞形态及生长特性, 并利用免疫荧光染色和PCR对牛肝干细胞相关标志物进行鉴定。实验分离的细胞接种48 h开始贴壁分裂, 随后呈集落样生长, 表现出干细胞的特性, 低密度下培养504 h后细胞呈肝细胞样分化。正常接种密度的细胞可传至P3代, HE染色可见细胞均为单核, 核浆比大, 呈幼稚低分化状态; 免疫荧光染色和PCR结果均显示, 该细胞表达甲胎蛋白AFP、上皮细胞粘附蛋白(EpCAM)、造血干/祖细胞表面标志CD34、干细胞因子受体蛋白(c-kit)、细胞角蛋白CK18、CK19。结果表明, 该研究分离了一种具有明显干细胞特征, 并表达成熟肝细胞和胆管上皮细胞表面标志物的牛肝干细胞。