不同培养代次对经血源子宫内膜干细胞生物学活性的影响

任雅坤^1,2 孙钰椋² 何亚南² 张胜辉^2,3 朱鑫星^2,4 刘彦礼^1,2* 程洪斌^4,5 丰慧根² 林俊堂^1,2,4

¹河南省医用组织再生重点实验室, 新乡 453003; ²新乡医学院生命学技术学院干细胞与生物治疗技术研究中心, 新乡 453003; ³新乡医学院第三附属医院, 新乡 453003; ⁴新乡医学院生物医学工程学院, 新乡 453003; ⁵解

摘要 :

该研究明确了不同培养代次经血源子宫内膜干细胞(menstrual blood derived endometrialstem cells, MenSCs)的生物学活性差异, 为深入研究MenSCs生物学特性及其潜在临床应用提供理论支持。该研究使用钙黄绿素AM(Calcein-AM)染色检测体外培养至第三代(passage 3, P3)、P9和P15代MenSCs的形态; β-半乳糖苷酶染色检测不同培养代次MenSCs的衰老程度; 活性氧试剂盒检测不同培养代次MenSCs中活性氧的变化; 随后利用MTT、流式细胞术及细胞活死染色在接触式共培养条件下检测P3、P9和P15代MenSCs对小鼠脾淋巴细胞活性、细胞周期、死亡情况以及脾脏淋巴细胞中CD3+和CD19+淋巴细胞比例的影响。结果表明, 随着培养代次的增加MenSCs细胞面积显著增大, 在培养至P15代时MenSCs开始出现大量丝状伪足。衰老程度及活性氧的含量也随培养代次的增加而显著升高; 随后与MenSCs接触式共培养体显著增加了小鼠脾淋巴细胞的活性, 降低淋巴细胞死亡率, 且随培养代次的增加, MenSCs对促进淋巴细胞存活、降低死亡的能力显著降低; 进一步细胞周期检测发现,MenSCs无刺激淋巴细胞增殖分裂活性, 但可显著降低淋巴细胞死亡及碎片化, 且培养代次的增加可显著降低MenSCs维持淋巴细胞存活的能力; 此外, 不同培养代次MenSCs在体外均对小鼠脾淋巴细胞中CD3+和CD19+细胞亚群百分比无显著性影响。综上, MenSCs随着体外培养时间和代次的增加, 出现明显的生物学活性降低等特征, 且对淋巴细胞活性的调节能力显著降低, 上述结果为临床应用中保障MenSCs质量、平衡细胞培养代次和细胞数量及保证稳定的MenSCs临床治疗效果提供理论支持。