体外循环患儿中性粒细胞自噬水平的变化及其对细胞存活的影响

易寒杨陶波宋娟王小燕肖宗懿王寿勇*

重庆医科大学附属儿童医院麻醉科; 儿童发育疾病研究教育部重点实验室; 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆); 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地; 儿科学重庆市重点实验室, 重庆 400014

摘要 :

为研究室间隔缺损修补术患儿体外循环(cardiopulmonary bypass, CPB)前后中性粒细胞自噬水平的变化, 及其对细胞存活率的的影响, 该研究以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿12例为CPB组, 超声引导下室间隔缺损外科微创封堵术患儿12例为对照(N-CPB组)。分别采集 T0(麻醉诱导后)、T1(CPB后/封堵器置入成功后)血液标本5 mL, 分离中性粒细胞, 用Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II的表达。结果显示, 与T0相比, CPB组T1时中性粒细胞Beclin-1、 LC3-II表达明显升高(P<0.05), 而N-CPB组无明显变化; 另以择期行CPB下室间隔缺损修补术的患儿6例为对象, 于T0、T1时采集血液标本5 mL, 分离中性粒细胞, 分为对照组和3-MA(自噬抑制剂) 组, 分别于0、1、2、4、8 h经锥虫蓝染色检测存活率。结果显示, 与T0比较, 来自T1的中性粒细胞存活率在0、1 h时显著升高(P<0.05); 加入抑制剂三甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)后, T0和T1 来源的中性粒细胞存活率均迅速降低(P<0.05); 与对照组比较, 3-MA组2、4、8 h时存活率显著降低(P<0.05)。该研究表明, CPB使室间隔缺损修补术患儿中性粒细胞自噬水平升高, 细胞存活时间延长, 抑制自噬能缩短细胞存活时间。