低温电转联合Sleeping beauty转座子系统增强CAR-T修饰效率

赵军红郑立群傅雅娟蔡少丽*

1福建师范大学南方生物医学研究中心, 福州 350117; 2福建省天然免疫生物学重点实验室, 福州 350117

摘要 :

嵌合抗原受体T淋巴细胞(chimeric antigen receptor T cells, CAR-T cells)在恶性B淋巴细胞瘤治疗上取得了显著成效。CAR-T治疗通过分离病人外周血单个核细胞PBMC, 经适当的基因编辑手段表达CAR结构, 令T细胞获得靶向肿瘤细胞的能力, 扩增后过继到体内完成对肿瘤的杀伤。该文主要探索在低温状态将含有睡美人(Sleeping beauty)转座子/转座酶系统的质粒电转进 PBMC内表达CD19-CAR制备CAR-T细胞, 并添加特定细胞因子进行增殖, 并验证CAR表达、细胞活性与杀伤能力。结果表明, 转染效率高达58.8%±4.1%, 增殖后的CAR-T细胞能够整合并表达 CAR基因, 在与靶细胞共培养后, 表现出与慢病毒制备的CD19-CAR相似的细胞活性和毒性。该文确定了一种基于Sleeping beauty转座子/转座酶和电转制备CAR-T细胞的方法, 为临床CAR-T治疗提供了新的思路。