TFEB介导的自噬溶酶体通路影响角质形成细胞分泌TGF-β1的机制研究

该研究探讨了转录因子EB(transcription factor EB, TFEB)介导的自噬溶酶体通路对角 质形成细胞(keratinocyte, KC)分泌转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGF-β1)的影响及机 制。以人皮肤KC为研究对象, 分为对照组、血清刺激组、血清刺激+磺酸去氧胆酸(tauroursodeoxychloic acid, TUDCA)组、血清刺激+TFEB siRNA组、血清刺激+NC siRNA组和血清刺激+氯喹组, 再 用KC条件培养基培养成纤维细胞(fibroblast, FB), ELISA检测KC上清液中TGF-β1含量, Western blot 检测KC内质网应激相关蛋白(GRP78、p-PERK)、自噬相关蛋白(LC3、LAMP1、TFEB)、凋亡相关 蛋白(p-elF2α、CHOP、caspase-3)的表达和FB平滑肌动蛋白α(smooth muscle actin α, α-SMA)、 I型胶 原(collagen I, COL I)的表达。血清刺激后, 免疫荧光染色检测KC内TGF-β1与LAMP1、LC3共定位。 加用氯喹后, 免疫荧光染色检测KC内Rab8a与TGF-β1、LAMP1共定位。与对照组比较, 血清刺激能 诱导KC分泌TGF-β1增多(P<0.01), 上调细胞内质网应激(增加GRP78、p-PERK表达, P<0.01)和细胞 自噬水平(增加TFEB、LC3 II、LAMP1表达, P<0.01)并增加FB α-SMA、COL I蛋白表达(P<0.01)。 加用磺酸去氧胆酸后, p-PERK和GRP78(P<0.05)表达降低, TFEB、LC3 II、LAMP1(P<0.05)表达降低。 与血清刺激组比较, siRNA敲低TFEB表达后, KC分泌TGF-β1明显下降(P<0.01), 内质网应激下游凋 亡相关蛋白p-elF2α、CHOP、caspase-3表达增强(P<0.01), FB的α-SMA、COL I蛋白表达减弱(P<0.01)。 血清刺激后, 免疫荧光显示, KC细胞内TGF-β1与LAMP1(P<0.01)、LC3(P<0.01)共定位程度明显增 加。而与血清刺激组比较, 加用氯喹后, 膜分泌蛋白Rab8a与TGF-β1(P<0.05)、LAMP1(P<0.01)共定 位程度显著减少, TGF-β1细胞外分泌减少(P<0.05)。TFEB介导的自噬不仅通过降解途径清除错误 折叠蛋白, 还通过参与TGF-β1分泌来降低内质网内蛋白负荷、抑制凋亡相关的caspase激活, 从而减 少KC损伤。