果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)过表达对骨肉瘤细胞恶性逆转并向成骨分化的影响

谢圣男¹ 康权² 张遥¹ 陈洁¹ 罗庆^1*

¹重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所; 儿童发育疾病研究教育部重点实验室; 国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(重庆); 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地; 儿科学重庆市重点实验室, 重庆 400014; ²重庆医科大学附属儿童医院肝胆外科, 重庆 4000

摘要 :

该研究探讨FBP1对人骨肉瘤MG63细胞恶性生物学行为即增殖、凋亡、迁移及成骨分化的调控作用。采用脂质体转染法将FBP1过表达重组质粒转染至人骨肉瘤MG63细胞中, 并通过qRT-PCR和Western blot法检测FBP1的mRNA和蛋白表达水平, 以验证FBP1基因过表达效果。通过CCK-8、结晶紫染色、活细胞计数法检测细胞增殖; AnnexinV-FITC双染法和DAPI染色法检测细胞凋亡, 并通过Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达; 应用细胞划痕实验、Transwell检测细胞的迁移能力; 通过流式细胞术检测细胞周期; ALP染色和茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化作用。结果表明, 过表达FBP1后增殖细胞数明显降低(P<0.01)、凋亡率明显增高(P<0.01)、划痕实验愈合率明显降低(P<0.01)、Transwell实验细胞穿膜数也明显减少(P<0.01); 成骨诱导 MG63细胞后ALP染色、茜素红染色阳性, 钙盐结节明显增多; 但3个组的细胞周期并无明显差异。综上所述, 过表达FBP1可抑制人骨肉瘤MG63细胞增殖, 抑制迁移, 促进其凋亡, 并同时促进MG63 细胞的早期和晚期成骨分化, 且其增殖并非通过细胞周期调节。