重组人bFGF的原核表达及功能分析

窦媛媛^1,2 林艳^2,3 高向征² 王燕芳² 王小引^1,2 王天云^1,2*

¹新乡医学院生物化学与分子生物学教研室, 新乡 453000; ²河南省重组药物蛋白表达系统国际联合实验室, 新乡453000; ³新乡医学院护理学院社区护理学教研室, 新乡 453000

摘要 :

为研究重组人碱性成纤维细胞生长因子(human basic fibroblast growth factor, bFGF)的原核表达及纯化条件, 并分析其功能, 该研究根据bFGF基因序列, 优化密码子, 构建pET-28a原核表达载体, 经IPTG诱导, SDS-PAGE电泳分析验证, 采用Ni柱进行分离纯化目的蛋白bFGF。培养NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞, 并进行CCK-8实验检测蛋白活性。结果显示, 成功构建原核表达载体。经电泳分析, 在1 mmol/L IPTG诱导条件下, 成功表达目的蛋白bFGF, 表达量约占菌体蛋白量32%, 蛋白纯度约为96%。活性检测结果显示, ED50分别为5.97 ng/mL、4.21 ng/mL、6.71 ng/mL, 可以有效促进NIH3T3细胞、HEK293细胞及CHO细胞增殖。该研究得出, 经原核表达系统成功表达人bFGF蛋白且其活性较高。