HOXA5对病理性瘢痕成纤维细胞功能的调控机制研究

该课题旨在研究HOXA5对病理性瘢痕成纤维细胞凋亡和细胞行为的影响, 以及HOXA5对细胞内p53通路活化的调控作用。取患者增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织, 分离培养成纤维细胞。将HOXA5过表达质粒转染细胞, 通过CCK-8检测细胞增殖情况, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况, Transwell检测细胞迁移能力, Western blot检测细胞内α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、黏着斑蛋白(vinculin)以及I、III型前胶原肽的蛋白含量, 并构建含成纤维细胞的胶原网架(FPCL)评价细胞收缩能力。进一步通过p53启动子荧光素酶报告基因检测HOXA5对p53通路的激活作用, ChIP PCR检测HOXA5与p53启动子区含ATTA的HOX核心结合序列的结合情况。Western blot检测p53下游靶点p21和MDm2蛋白含量。结果显示, 转染了HOXA5过表达质粒的细胞增殖活性下降, 迁移、收缩能力减弱, 细胞凋亡情况加重, 细胞内α-SMA、vinculin以及I、III型前胶原肽的蛋白含量减少。细胞内进一步的机制研究发现, HOXA5过表达可以促进p53启动子荧光素酶报告基因的表达, ChIP PCR检测发现, 过表达HOXA5后, p53启动子区富含ATTA的HOX核心结合序列区域结合的HOXA5增多, 并且p53下游靶点p21和MDm2蛋白含量显著增加。综上, 该实验证实了HOXA5可以激活病理性瘢痕成纤维细胞内p53凋亡通路, 并促进细胞凋亡, 抑制细胞的增殖、迁移和收缩能力。