WEB2基因在酿酒酵母S期检查点通路上调控RNR3基因表达

摘要 : WEB2基因参与酿酒酵母S期检查点调控机制，而 RNR3基因位于该调控通路末端，DNA损伤或合成阻断时，S期检查点通路诱导 RNR3过度表达。因此，通过确定WEB2在该检查 点通路上是否参与调控RNR3基因的表达，将有助于进一步明确 WEB2基因在检查点通路上的工作位点，了解WEB2 基因如何发挥检查点调控功能。构建RNR3-LacZ 基因融合质粒，用于检测酵母细胞内RNR3基因的诱导性。诱导性可以通过测定 b-半乳糖苷酶的活性而得知。利用DNA损伤药物甲磺酸甲酯(MMS)及DNA合成阻断剂羟基脲(HU)处理酵母细胞，测定 WEB2基因突变株和野生株细胞内RNR3基因的诱导性。结果， WEB2突变株细胞中诱导活性分别增加(8.27?.38)倍和 (9.55?.24)倍，而野生株分别增加了(83.32?.42)倍和(124.67 ?.87)倍。反映RNR3基因在WEB2突变株中的诱导性低于野生株。同 RAD53突变株相比，后者的RNR3基因的诱导性更低，仅为 (2.37?.18)倍和(2.91?.13)倍。说明WEB2基因突变影响S期检查点通路的信号传递至 RNR3基因，所以在酿酒酵母S期检查点通路上，WEB2 工作在RNR3基因上游，参与调控RNR3的表达， 但调控能力不如RAD53基因强。