炎症上调NPC1加重高脂负荷下HMCs胆固醇积聚致细胞损伤机制

李倩倩¹ 杨雪钧¹ 阳海平¹ 陈压西² 张高福^1* 李秋^1*

¹重庆医科大学附属儿童医院肾脏内科, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 儿童感染免疫重庆市重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 重庆 400014;²重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室, 脂质研究中心, 400014 重庆

摘要 :

观察炎症因子IL1-β对高脂负荷下人肾脏系膜细胞(human glomerular mesangial cells, HMCs)C型尼曼匹克蛋白1(Niemann-pick protein c1, NPC1)表达水平的影响, 并初步探讨NPC1介导的胆固醇积聚致细胞损伤的作用机制。体外培养HMCs分为正常对照组、高脂组、高脂+炎症组。Western blot测NPC1蛋白含量; 酶法测细胞及内质网胆固醇水平; CCK8法测细胞增殖; 流式细胞术测细胞周期; 荧光定量PCR测NPC1、GRP78、PERK、ATF6、FN、Col IV mRNA; 免疫荧光技术测GRP78、FN的表达水平。予U-18666A干预NPC1的功能, 观察内质网胆固醇水平、细胞增殖能力、GRP78、FN、Col IV mRNA水平的变化。结果显示, 高脂促进NPC1蛋白及mRNA的表达水平,同时细胞总胆固醇及内质网胆固醇浓度增加, 增殖加快、S期比例增加、内质网应激相关分子—GRP78、PERK、ATF6 mRNA及系膜基质成分—FN、Col IV mRNA水平均增加, GRP78、FN的荧光强度也增加; 炎症进一步上调高脂负荷下上述各指标水平。U-18666A干预后可减轻高脂和炎症导致的内质网胆固醇积聚及细胞损伤。综上, 炎症可通过上调NPC1的表达水平, 加重高脂负荷下肾系膜细胞及内质网胆固醇积聚, 诱发细胞损伤。