利用同源重组对酵母人工染色体左右臂进行多基因修饰

刘丽荣¹　卢步峰^*　吕子卿　卢　波　张小蕾¹　郭礼和^*

中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031；上海赛达生物技术研究中心，上海201203；¹ 贵阳医学院，贵阳550004

摘要 : 构建携带哺乳动物细胞筛选基因和酵母人工染色体(YAC)同源序列的载体，利用酵母中能够发生高频率同源重组的特点对YAC分别进行左、右臂修饰，依次将NEO、EGFP及 PURO基因定点整合到YAC左右臂上。用营养缺陷筛选的方法排除酵母发生突变或随机整合等情况后，用PCR及Southern杂交方法证实各筛选基因定点整合于YAC两臂上，从而获得携带3个哺乳动物细胞筛选基因的YAC克隆。并且由此建立了通过同源重组将哺乳动物标记基因定点引入YAC左右臂的多基因修饰平台。