下调TRPC5的表达对卵巢癌细胞耐药性影响的研究

傅倩云¹朱瑞宇² 方罗¹ 吴妙莲¹ 蔡志波¹ 金坚^2*

1浙江大学医学院附属儿童医院, 杭州 310003; 2江南大学药学院, 无锡 214122

摘要 :

为探究瞬时受体通道5(transient receptor potential canonical 5, TRPC5)是否参与影响卵巢癌细胞对紫杉醇(paclitaxel, PTX)的耐药性, 转染TPRC5-siRNA至A2780/PTX细胞。MTT检测A2780/WT、A2780/PTX和A2780/PTX细胞+siTRPC5对紫杉醇的敏感性; RT-PCR和Western blot检测TRPC5、P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的mRNA和蛋白表达水平; 细胞免疫荧光检测β-catenin、c-myc和Cyclin D1蛋白的表达水平。MTT、RT-PCR和Western blot结果显示, A2780/PTX细胞对PTX的敏感性(IC50=84.4 μmol/L)低于A2780/WT细胞(IC50=1.98 μmol/L), A2780/PTX细胞的TRPC5和P-gp的mRNA和蛋白表达水平显著高于A2780/WT细胞; 用siTRPC5敲低A2780/PTX细胞TRPC5的表达水平, 可显著减少其P-gp的表达量, 降低A2780/PTX细胞对PTX的敏感性。细胞免疫荧光实验结果显示, 降低A2780/PTX细胞TRPC5的表达水平, 细胞核中β-catenin的表达量减少, 且CyclinD1和c-myc的表达量也明显降低。TRPC5参与影响卵巢癌细胞对紫杉醇的耐药性, 并且通过Wnt/β-catenin信号通路影响耐药蛋白P-gp的表达进而影响其耐药性。