表达APPswe695基因细胞系的构建及Aβ分泌水平的分析

摘要 : 为探究β-淀粉样前体蛋白(amyloid-β precursor protein, APP)在阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)发病过程中的作用及构建应用于AD发病机理研究的实验细胞模型, 该研究构建了过表 达APP695瑞典型突变体(APPswe695)的SH-SY5Y细胞系(APPswe695细胞)并分析了该细胞系中Aβ的分 泌水平。采用慢病毒介导转染方法, 将APPswe695表达质粒转染至SH-SY5Y细胞, 抗性药物筛选阳 性转染细胞。分别采用RT-PCR、Western blot技术验证APPswe695 mRNA、APP蛋白的表达, ELISA 分析Aβ1-40和Aβ1-42的分泌水平。结果显示, 转染慢病毒包装的APPswe695质粒后, 细胞的APPswe695 mRNA表达呈现阳性; 与野生型细胞和转染质粒空白细胞相比, 转染APPswe695基因细胞表达APP695 的瑞典型突变蛋白(APPswe695)。APPswe695具有与内源性APP770相同的细胞分布。转染APPswe695基 因后, 细胞内分泌Aβ水平增加(P<0.05)而细胞外液中Aβ含量并没有显著变化。由此说明, APPswe695 细胞能够表达被转染的APPswe695基因, APPswe695细胞倾向于产生更多的胞内而不是胞外Aβ, APPswe695细胞可应用于阿尔茨海默病发病机理及药物治疗的研究。