解脲脲原体UPA3-0382基因原核表达载体的构建与表达分析

摘要 : 为了探讨解脲脲原体UPA3-0382基因的功能, 该研究构建了解脲脲原体UPA3-0382基 因的原核表达载体, 并对其表达蛋白进行了初步的生物信息学分析。首先, 利用PCR方法克隆得 到624 bp的UPA3-0382基因, 使用限制性内切酶BamH I和Not I酶切目的基因和质粒pGEX-6P-2, 并 用T4连接酶连接后转化入大肠埃希菌感受态XL1-Blue中, 并诱导表达蛋白, 而后运用生物信息学 软件分析编码蛋白的结构及功能。结果显示, 克隆出的UPA3-0382基因测序结果经Blast比对显示 同源性为100%, 表达出分子量约为50 kDa的GST-UPA3-0382融合蛋白, 大小与预期一致, 经生物 信息学软件分析该蛋白由207个氨基酸组成, 分子式为C1075H1749N305O348S3, 分子量为24.62 kDa, 理 论等电点为6.40。二级结构中含有α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲, 比例分别为48.79%、 16.91%、7.25%和27.05%, 无信号肽及跨膜区域, 蛋白质空间结构及功能预测显示, 该蛋白为假设蛋白, 推测其可能参与了解脲脲原体信号转导与能量代谢等作用, 为进一步研究解脲脲原体奠定了基础。