黄酒酵母一个新基因的鉴定及其对酵母抗逆性能的影响

摘要 : 该文鉴定了一个来自黄酒酵母菌株D2的新基因g5170, 并研究了其对黄酒酵母环境 胁迫耐受性与发酵性能的影响。生物信息学分析发现, 此基因编码的蛋白质含有酰胺酶(amidase) 保守功能域, 并在YPD培养条件下有较高的基因表达量。利用Cre/loxP系统构建了基因g5170的 敲除菌株, 通过扩增带有g5170基因上下游同源序列和kanr筛选标记的基因敲除组件, 并通过醋酸 锂法转化到黄酒酵母菌株D2获得阳性克隆子, 然后将质粒pSH65转到阳性克隆子中, 半乳糖诱导 pSH65表达Cre酶切除kanr筛选标记。重复此实验过程, 最终获得两个g5170基因拷贝完全缺失菌株D2Δg5170。梯度生长实验显示, 与原始菌株相比, 敲除菌株对高糖浓度、高温耐受性无明显变 化, 但对乙醇胁迫的耐受性显著降低, 而过表达g5170的重组酵母菌株对乙醇的耐受性明显比对照 菌株强。模拟黄酒发酵实验结果表明, 敲除菌株D2Δg5170的生长速率、乙醇产量及理化指标与 原始菌株相似。因此, g5170基因可能与黄酒酵母适应乙醇胁迫有关, 并有助于提高酵母的黄酒发酵性能。