制备磷酸化抗体结合反相蛋白阵列探测细胞通路模型信号

摘要 : 通过制备、鉴定与筛选可靠应用于反相蛋白阵列(reverse-phase protein array, RPPA) 的磷酸化抗体作为探针, 建立LNCaP细胞中Akt、 Erk/MAPK通路在4种方式(EGF、LY294、PMA、 NaCl)刺激下信号变化的细胞通路模型, 利用RPPA技术探测细胞通路模型的信号。结果获得4组细 胞通路模型的RPPA测定数据及25个RPPA适用性的磷酸化抗体探针。4组模型结果均显示了通路 中关键信号分子响应于4个外部扰动的磷酸化状态的动态变化。RPPA结果数据与相应的免疫印迹 法(Western blot)分析结果一致, 证实了分析数据的有效性与可靠性。结果表明, 所制备磷酸化抗体 探针与RPPA平台结合, 极适合于分析细胞信号通路模型。该方法能够有效地拓展RPPA探针范围, 使其成为新药开发、临床样本分析等领域的先进工具。