离心法增加HaCaT细胞的基因转染效率

徐云飞1 孟莎莎1 周卫辉1* 李红梅2*

1重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 认知发育与学习记忆障碍转化医学重庆市重点实验室, 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地; 2重庆医科大学附属儿童医院皮肤科, 重庆 400014

摘要 :

HaCaT细胞是自发性的人永生化表皮细胞株, 常用于皮肤功能与疾病的相关研究, 但常规脂质体法转染该细胞的效率极低。该研究主要探讨离心是否能够增加脂质体法转染HaCaT细胞的效率。以Lipofectamine® 2000为脂质体转染试剂, pEGFP-C1为质粒转染HaCaT细胞后分别使用常规法和离心法处理, 利用荧光倒置显微镜和流式细胞仪测定转染效率; 细胞增殖活力实验检测离心是否对细胞活力产生影响; 荧光素酶报告基因、Western blot实验检测离心法实际效应对目的基因表达的影响。结果表明, 离心法处理组所测得的转染效率均高于常规法处理组, 差异有统计学意义。荧光素酶报告基因实验、Western blot实验则进一步证实了转染后离心的性价效应能增加目的基因的表达, 具有较高的实用性。综上所述, 常规转染步骤后离心能够增加HaCaT细胞的基因转染效率。