泛素特异性蛋白酶46的分子克隆及基因突变对其功能的影响

张景坤1 张玮2* 魏群3 祁素芬4 秘迎君4 贾媛5 吕红芝6 赵静7 刘淑霞2

1河北医科大学, 国际教育学院, 石家庄 050017; 2河北医科大学, 病理教研室, 石家庄 050017; 3河北省人民医院, 感染管理科, 石家庄 050000; 4河北医科大学, 流行病与卫生统计学教研室, 石家庄 050017; 5河北医科大学第二医院, 医院感染管理科, 石家庄 050000; 6河北医科大学

摘要 :

该文探讨了行为绝望相关基因—泛素特异性蛋白酶46(usp46)基因的生物学功能及编码区错义突变对其功能的影响。从人类食管癌细胞株TE-1中提取总RNA, RT-PCR扩增获得人类 usp46基因, qRT-PCR检测小鼠各组织中该基因的mRNA相对表达水平; 运用去泛素化酶活性检测体系, 将USP46与模型底物表达质粒共转化, 研究USP46的活性; 采用定点突变法构建错义突变V89I, 用上述方法检测突变对酶活性的影响。结果发现, 人类usp46基因具有1 101 bp的开放阅读框, 编码 366个氨基酸; 序列比对显示, 其在各个物种中高度保守; 在小鼠脾脏中mRNA表达量较高, 而骨骼肌中表达较少; 人类的USP46蛋白具有去泛素化酶活性, V89I突变后, 其活性显著下降, 仅为野生型的37.67%±2.52%(P<0.05)。结果表明, usp46基因在小鼠各组织中的mRNA表达水平存在差异; 人类USP46蛋白具有去泛素化酶活性, 而且其编码区V89I错义突变后, 其活性显著下降, 为抑郁症等神经精神性疾病的病因学研究提供了新的线索。