巨噬细胞冠蛋白-1 siRNA对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

巨噬细胞冠蛋白-1(Coronin-1)与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)逃逸 免疫杀伤有关。该研究探讨了pS-EGFP-SP-Coronin-1siRNA重组质粒靶向抑制巨噬细胞Coronin-1 表达后对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。用该质粒转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7, 采用RT-PCR 法和Western blot检测质粒转染前后细胞Coronin-1的表达水平。以耻垢分枝杆菌分别感染转染质 粒组细胞和对照组细胞, 通过细胞内细菌菌落计数和细胞爬片抗酸染色法评估巨噬细胞转染质粒 前后对细菌的吞噬能力; 利用流式细胞术检测转染质粒组细胞及对照组细胞吞噬耻垢分枝杆菌后不同时段的细胞凋亡水平。结果显示, 该质粒能显著抑制RAW264.7细胞Coronin-1的mRNA水平及蛋白表达水平; 感染耻垢分枝杆菌6 h后, 转染质粒组细胞内细菌数显著高于对照组细胞(P<0.05); 感染耻垢分枝杆菌48 h后, 转染质粒组细胞凋亡水平显著高于对照组细胞(P<0.05)。以上结果表明, pS-EGFP-SP-Coronin-1siRNA重组质粒能显著抑制巨噬细胞Coronin-1的表达, 并可显著促进巨噬细胞吞噬细菌和凋亡杀菌, 为开发靶向巨噬细胞Coronin-1的抗结核基因治疗措施奠定基础。