全反式维甲酸调控自噬促进肝祖细胞成熟分化的作用研究

崔洁洁1,2 方姝煜1 龚梦嘉1 何昀1 毕杨1*

1重庆医科大学附属儿童医院儿研所干细胞实验室, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室, 重庆市干细胞治疗工程技术研究中心, 重庆 400014; 2濮阳市人民医院儿科, 濮阳 457000

摘要 :

该研究探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)体外诱导小鼠胚胎肝祖细胞HP14-19细胞成熟分化及ATRA对细胞自噬水平的调控作用。应用1 μmol/L ATRA处理小鼠胚胎肝祖细胞HP14-19细胞, 不同时间点进行荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc活性, Real-time PCR检测肝细胞相关标志基因的表达, 吲哚菁绿(indocyanine green, ICG)及过碘酸–希夫(periodicacid-schiff, PAS)染色检测细胞的成熟功能; 透射电镜观察自噬体及细胞连接, ptfLC3质粒转染细胞, 激光共聚焦显微镜观察自噬流, Western blot检测自噬相关标志蛋白质水平等综合分析自噬的变化情况。结果显示, 与对照组相比, ATRA可显著增强HP14-19细胞ALB-Gluc活性, 抑制肝前体细胞标志DLK和AFP的表达, 促进成熟肝细胞标志ALB、CK18、TAT和ApoB的表达, ICG及PAS染色阳性细胞数显著增多(P<0.05); 透射电镜结果可见ATRA诱导组出现大量自噬体和自噬溶酶体, 同时细胞间紧密连接增多, 并且自噬相关标志蛋白质Beclin1、LC3-II、RAB7水平增高, P62水平无显著变化, LC3- II/LC3-I的比值明显增加(P<0.05); 激光共聚焦显微镜可见ATRA组细胞胞浆内黄色斑点的自噬体及红色斑点的自噬溶酶体均较对照组明显增多, 自噬抑制剂3-MA和Baflomycin可抑制ATRA诱导的HP14-19细胞的ICG摄取和糖原合成功能。综上所述, ATRA可能通过调节细胞自噬水平有效诱导小鼠胚胎肝祖细胞的分化成熟。