携带线粒体CO1/tRNASer(UCN) 7444G>A突变和 12S rRNA 1555A>G突变的非综合征性耳聋家系的 线粒体功能研究

该研究通过构建携带突变的血小板融合细胞系, 探讨12S rRNA 1555A>G和CO1/ tRNASer(UCN) 7444G>A突变对线粒体功能的影响。首先, 采集携带12S rRNA 1555A>G和CO1/ tRNASer(UCN) 7444G>A双突变患者、单突变及正常对照组外周血, 构建血小板融合细胞系。其次, 对构建成功的血小板融合细胞系进行一系列功能研究, 包括细胞内活性氧类(ROS)生成量、线粒体 膜电位水平、蛋白质水平和tRNA稳态水平的分析。通过对各组血小板融合细胞系的线粒体功能的研究, 结果与对照组相比发现, 细胞内ROS成量显示, 仅携带m.1555A>G单突变组细胞ROS上升 66.54%, 仅携带m.7444G>A单突变组细胞ROS上升83.09%, 而同时携带m.1555A>G和m.7444G>A 双突变组细胞ROS上升131.08%; 线粒体膜电位水平显示, m.1555A>G单突变组的ΔΨm水平下降 32.86%, m.7444G>A单突变组的ΔΨ水平下降0.66%, m.1555A>G和m.7444G>A双突变组的ΔΨm 水平下降29.86%; Western blot结果显示, 各突变样本的CO1、CO2均有不同程度的下降, 仅携带 m.1555A>G单突变组中ND4、ND5和ND6差异不明显, 而仅携带m.7444G>A单突变组和m.1555A>G 和m.7444G>A双突变组中ND4、ND5和ND6均有不同程度的下降; Northern blot结果显示, m.7444G >A对tRNASer(UCN)稳态水平的改变并不是很明显。提示CO1/tRNASer(UCN) 7444G>A突变可能只是12S rRNA 1555A>G突变的病理效应的修饰因子, 但在耳聋的发生过程中, 还是12S rRNA 1555A>G突变起主导作用。