一种新的B链C端去四肽胰岛素的研制方法

王一成　石嘉豪¹　张元兴　费　俭^1*

华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海200237; ¹同济大学生命科学与技术学院, 上海200092

摘要 : 报道了将单体胰岛素前体(MIP)经胰蛋白酶和羧肽酶B两步连续酶切获得B链C端去四肽胰岛素(DTI)的方法。MIP由甲醇酵母表达，最高发酵表达量达到150 mg/L。发酵液中MIP通过疏水层析，分子筛初步纯化后直接进行酶切，在胰蛋白酶酶切3 h后加入抑制剂p-aminobenzamidine 处理15 min，然后直接加入羧肽酶B酶切6 h，再通过反相柱纯化即可得到纯品DTI，从分子筛到最后DTI，总纯化得率达到77%。按中国药典小白鼠惊厥法测定得DTI的生物活力为22IU/mg，是胰岛素的80%，在Superdex G-75分子筛上测定DTI的解离聚合曲线，证明其是单体。