肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS对BDNF基因表达调控作用的研究

摘要 : 该文旨在探讨肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS(antisense brain derived neurotrophic factor)对BDNF基因表达的调控作用。将BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒瞬时转染肝癌细胞HepG2后采用qPCR方法检测肝癌细胞中lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA水平; 采用Western blot方法检测BDNF蛋白质水平; 采用ELISA方法检测细胞培养上清中BDNF蛋白质水平; 采用免疫荧光染色检测BDNF蛋白质水平; 采用FISH方法检测lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA的水平和亚细胞定位。研究结果显示, 转染BDNF AS质粒的细胞中, lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P<0.001), BDNF mRNA和蛋白质水平均低于对照组(P<0.001)。转染突变体质粒的细胞中, lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P<0.05), 低于BDNF AS组(P<0.001), BDNF mRNA和蛋白质水平低于对照组(P<0.05, P<0.001), 高于BDNF AS组(P<0.05, P<0.001)。免疫荧光染色发现, 转染BDNF AS质粒和转染突变质粒细胞的平均D值均低于同一视野中未转染的其他细胞(P<0.05, P<0.01)。FISH染色显示,转染BDNF AS质粒的细胞中, BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P<0.001); 转染突变质粒的细胞中, BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P<0.05), 高于lncRNA BDNF AS过表达的细胞(P<0.05)。该研究结果表明, 肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS过表达下调BDNF mRNA和蛋白质水平, 二者基因完全互补序列参与lncRNA BDNF AS对BDNF基因表达的调控作用。