线粒体DNA数目不同的人角质形成细胞模型的建立

摘要 : 该研究采用溴化乙锭(ethidium bromide, EtBr)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)进行诱导, 采用RT-PCR法、MTT法和健那绿染色技术联合鉴定EtBr对HaCaT细胞线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)拷贝数的影响, 建立不同mtDNA拷贝数目的HaCaT细胞模型。结果显示, HaCaT细胞经100 ng/mL和50 ng/mL EtBr分别处理10 d后, 细胞形态随着处理时间的延长发生改变, 由规则铺路石形状逐渐变圆, 某些细胞体积变小, 成团生长, 细胞膜边缘不光滑, 且随着mtDNA数目的减少, 细胞增殖速率明显下降。RT-PCR分析结果显示, 与对照组相比, 50 ng/mL和100 ng/mL EtBr处理10 d的HaCaT细胞中, mtDNA的拷贝数分别减少了52.9%和97.6%[以线粒体DNA脱氢酶1(mitochondrial NADH dehydrogenase 1 gene, ND1)与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)的比值来表示mtDNA的相对拷贝数变化情况]。健那绿染色显示, 对照组HaCaT细胞中可见分散存在的蓝绿色线粒体颗粒, 100 ng/mL EtBr处理10 d后的HaCaT细胞中, 显微镜下蓝绿色线粒体颗粒明显减少。综上所述, 该研究证明了HaCaT细胞可通过EtBr诱导被成功培养成ρ–细胞, 且EtBr浓度与HaCaT细胞mtDNA拷贝数的变化在一定的范围内存在着剂量–效应关系。