紫檀芪通过激活自噬缓解脊髓神经元细胞氧化应激损伤的作用及其机制

摘要 : 自噬在保护脊髓神经元细胞氧化应激损伤中具有重要的作用。紫檀芪(pterostilbene, PTE)是具有抗氧化作用的天然植物的提取物, 但其对神经元细胞的作用及其机制尚不清楚。该文采用CCK-8分析PTE对大鼠原代脊髓神经元细胞的细胞毒性; 不同浓度PTE作用神经元细胞24 h和48 h, 透射电镜和Western blot检测微管相关蛋白轻链3-II(microtubule-associated protein 1 light chain 3-II, MAP1LC3-II)、Beclin-1和P62蛋白质水平并分析自噬水平。PTE处理H2O2作用下的神经元细胞24 h, Western blot检测LC3-II水平, GFP-LC3转染观察自噬的数量。2′,7′-二氯二氢荧光素乙酰乙酸(2′,7′-dichloro-djhydrofluorescein diacetate, DCFDA)和MitoSOX染色分析细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平, 自噬相关基因5(autophagy related gene 5, ATG5)siRNA转染分析自噬在其中的作用。结果显示, 20 μmmol/L PTE对于神经元细胞无细胞毒性, PTE作用下神经元细胞中LC3-II、Beclin-1蛋白质水平呈剂量依懒性升高, 而P62则呈剂量依懒性下降(P<0.05)。PTE增加H2O2作用下的神经元细胞中LC3-II蛋白质水平(P<0.05), 自噬体数量增加, PTE可提高神经元细胞中自噬体数量。PTE明显降低神经元细胞中ROS水平, 但ATG5 siRNA转染抑制自噬后显著逆转PTE的保护作用。该研究结果提示, PTE可能通过提高氧化应激状态下的脊髓神经元细胞自噬水平来抑制细胞ROS的产生。