II型肺泡上皮细胞Brg1基因条件敲低小鼠的基因型鉴定

司道祝¹ 彭单伊¹ 张荣³ 夏耘秋² 牛超² 苟好¹ 刘姜¹ 王莉佳¹ 田代印² 刘恩梅² 邹琳¹ 符州^1*

¹重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所, 儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地, 重庆市干细胞治疗工程技术研究中心, 重庆 400014;
²重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心, 重庆 400014;
³第四军医大学

摘要 : 该文旨在鉴定特异敲低II型肺泡上皮细胞中Brg1(Brahma-related gene 1)基因小鼠的基因型, 为进一步研究Brg1在肺相关疾病中的作用奠定基础。将两对转基因小鼠Brg1fl/fl和SP-C-rtTA/(tetO)7-Cre进行繁殖交配, 将得到纯合子、杂合子及野生型3种基因型。出生后1周龄剪尾提取基因组DNA, PCR法判定基因型。用多西环素诱导法诱导(tetO)7-Cre重组酶活性, 靶向剪切II型肺泡上皮细胞上Brg1基因, 磁珠分选法提取小鼠原代II型肺泡上皮细胞, 通过观察细胞生长特征、检测proSP-C表达鉴定原代II型肺泡上皮细胞, RT-PCR法、Western blot检测Brg1表达水平。结果显示,成功繁殖了Brg1纯合子小鼠, 通过磁珠分选法成功分离了原代II型肺泡上皮细胞, 用多西环素诱导法成功敲低了II型肺泡上皮细胞Brg1基因。该结果为相关研究提供动物模型奠定了基础。