低氧高二氧化碳对肺动脉平滑肌细胞TRPC1/4表达影响及其与细胞增殖、凋亡的关系

郑梦晓^1,2 赵美平¹ 张聪聪¹ 贾旭广³ Wu Yiming⁴ 陈锡文⁵ 王万铁^1*

¹温州医科大学病理生理学教研室, 温州 325035;
²黄河科技学院医学院, 郑州 450063;
³四川省宜宾卫生学校内科教研室, 宜宾 644000;
⁴Division of Cardiovascular Medicine University of Iowa Carver College of Medici

摘要 : 该文旨在研究低氧高二氧化碳时C型瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1, TRPC1)和TRPC4的表达变化与肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的关系。经免疫荧光鉴定后随机分为5组: 常氧对照组(N)、低氧高二氧化碳组(H)、溶剂二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组(D)、TRPC1/4抑制剂SKF-96365组(S)和TRPC1/4激动剂环匹阿尼酸(cyclopiazonicacid, CPA)组(C)。N组置于常氧培养箱(21% O2、5% CO2、37 °C)中培养24 h, 其余4组放于低氧高二氧化碳培养箱(5% O2、6% CO2、37 °C)中培养24 h。采用逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription polymerase chain reaction, RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测TRPC1和TRPC4的mRNA和蛋白质水平; CCK-8法检测各组细胞增殖情况; 原位末端标记法(TdT-mediateddUTP nick-end labeling, TUNEL)检测各组细胞凋亡指数(apoptotic index, AI); Fura 2-AM法检测细胞内钙离子浓度[Ca2+]i。结果发现, H组TRPC1和TRPC4的mRNA和蛋白质水平以及细胞增殖和[Ca2+]i均高于N组(P<0.05), 而凋亡指数低于N组(P<0.05)。与H组相比, S组TRPC1/4的mRNA和蛋白质水平以及细胞增殖和[Ca2+]i均降低(P<0.05), 细胞凋亡增加(P<0.05); C组TRPC1的mRNA和蛋白质水平以及细胞增殖和[Ca2+]i增加(P<0.05), 细胞凋亡率下降(P<0.05), 但C组TRPC4的mRNA和蛋白表达变化无统计学意义(P>0.05)。以上结果说明, 在低氧高二氧化碳情况下, TRPC1/4的mRNA和蛋白质水平以及[Ca2+]i均增高, 细胞的增殖和凋亡与细胞内TRPC1的表达变化有关。