利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建TP53基因敲除HeLa细胞系

董文洁¹ 杨远勤¹ 方先龙² 尹晓飞² 徐燕妮² 王娇娇¹ 褚亮² 王如伟³ 方玲³ 吴帅^2* 刘新垣^1,2*

¹浙江理工大学生命科学学院新元医学与生物技术研究所, 杭州 310018;
²中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所, 上海 200031;
³浙江康恩贝制药股份有限公司, 杭州 310018

摘要 : 该研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated protein 9)基因编辑系统构建了TP53(tumor antigen p53)基因敲除HeLa细胞系。CRISPR/Cas9系统能够精确地切开TP53基因并在双链断裂处插入选择标记(通过与供体质粒进行同源重组获得)。进一步的功能试验表明, TP53基因敲除的HeLa细胞拥有更强的细胞增殖能力、化疗耐药性以及氧化应激能力, 提示HeLa(TP53–/–)恶性程度增强。所有的数据旨在描述一个简单和有效的方法, 即通过CRISPR/Cas9系统来构建基因缺失细胞系, 期望在较大程度上帮助研究和阐明基因功能以及细胞机制。