利用CRISPR/Cas9技术建立诱导性敲除MEIS1基因的HEK293T细胞株

张明智^1# 王梦鸽^2# 王洪涛² 苏培² 刘鑫² 张磊升² 刘翠翠² 王钰² 吴丹² 周家喜^2* 彭莎^1*

¹西北农林科技大学动物医学院, 陕西省干细胞工程技术研究中心,陕西省农业分子生物学重点实验室, 杨凌 712100;
²中国医学科学院, 北京协和医学院血液病医院(血液学研究所), 实验血液学国家重点实验室, 天津 300020

摘要 : CRISPR/Cas9是新一代基因组编辑技术, 可简便快捷地在哺乳动物细胞对基因进行敲除、敲入。但常规的CRISPR/Cas9表达系统直接转染效果差、病毒包装效率低, 极大地限制了CRISPR/Cas9系统的广泛使用。该研究应用Tet-on系统, 建立了Dox诱导Cas9表达的293T细胞株,命名为293T-iCas9。MEIS1(myeloid ectropic viral integration site 1)是TALE(three amino acid loopextension)同源域家族的转录因子, 其在白血病发生发展、胚胎造血系统发育及神经系统发育中有重要作用, 但其作用机制仍未完全明确。将靶向MEIS1 Exon3的sgMEIS1表达载体转入293T-iCas9,SURVEYOR实验和Western blot检测结果表明, sgMEIS1有效地指导Cas9进行基因组编辑。最终经测序和Western blot结果证明, 成功建立了MEIS1敲除细胞株, 这为研究MEIS1的功能提供了重要的工具。