一种发育期皮质脊髓投射神经细胞基因表达谱的研究方法

曲春生^1,2 赵月娥^1,3 陈嘉琦² 高英^1*

¹卫生部视觉科学重点实验室, 温州医科大学眼视光学院, 温州 325027; ²丽水市人民医院检验科,温州医科大学附属第六医院, 丽水 323000; ³丽水市中心医院眼科, 温州医科大学附属第五医院, 丽水 323000

摘要 : 皮质脊髓投射神经细胞(cortico-spinal projection neurons, CSPN)对于大脑的功能非常重要, 但目前还缺乏研究小鼠发育期CSPN基因表达谱的有效方法。将出生后2 d(P2)的小鼠在脊髓交叉处注射逆行标记的神经示踪剂，并在P8时进行激光显微切割。提取捕获细胞的RNA并线性放大, 而后利用定量PCR进行皮层标记基因的验证, 线性放大后的RNA与大脑皮层组织的RNA相比,第五皮层标记基因Fezf2(Fez family zinc finger 2)表达明显升高, 第四、第六皮层标记基因Rorβ(RAR related orphan receptor β)、Foxp2(forkhead box P2)的表达相对较低。之后, 进行小鼠基因芯片表达谱检测, 通过基因功能富集度分析发现, 在CSPN中大多数富表达的基因都与G蛋白偶联受体信号通路以及运动行为有关。而且, 染色质的修饰和编排相关基因在CSPN里也有富集表达。通过定量PCR进一步验证了芯片中CSPN的富集基因, 结果发现, Meg3(maternally expressed gene 3)等7个基因在大脑第五皮层表达丰富。该研究将在体神经细胞荧光标记、激光捕获显微切割、RNA线性放大、基因芯片及定量PCR等多种技术结合起来, 提供了一种研究发育期小鼠CSPN基因表达谱的方法。