羊核因子I/B的3个蛋白质异构体功能差异分析
张潇飞1 宋 鹤1 荣恩光1 杨 华2 闫晓红1 李玉茂1 李 辉1 王 宁1*
1东北农业大学动物科学技术学院, 哈尔滨 150030; 2新疆农垦科学院畜牧兽医研究所, 石河子 832000
摘要 : 核因子I/B(nuclear factor I/B, NFIB)是一个重要的转录因子, 在细胞增殖、凋亡和组织
发育等生物学过程中发挥重要作用。前期研究发现, 绵羊NFIB基因存在3个转录异构体(transcript isoform), 分别编码3个不同的蛋白质异构体(protein isoform): NFIB-1(48 kDa)、NFIB-2(43 kDa) 和NFIB-3(39 kDa)。目前, 这些蛋白质异构体之间的功能差异还不清楚。为此, 该研究分别设计了羊NFIB基因转录异构体的特异性表达检测引物, 采用Real-time PCR开展NFIB基因3个转录异构体的组织表达谱分析; 分别构建NFIB基因的3个蛋白质异构体的真核表达载体, 转染HaCAT细胞, 采用CCK-8、Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒比较了这3个NFIB异构体对HaCAT细胞增殖和凋亡的影响。结果显示, NFIB基因3个转录异构体在绵羊的皮肤、脂肪、肾脏等多种组织和器官中表达, 但它们在不同组织和器官中的相对表达量不同。CCK-8细胞增殖分析显示, 与对照相比, NFIB-1具有促进HaCAT细胞增殖的作用(P<0.01), NFIB-2的作用不明显, 而NFIB-3显著抑制HaCAT细胞的增殖(P<0.01)。Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测发现, 这3个蛋白质异构体在一定程度上均促进HaCAT细胞的凋亡, 其中, NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡的作用强于NFIB-2(P<0.01), 但NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡作用的差异不显著。这些结果表明, 羊NFIB的3个蛋白质异构体在细胞增殖和凋亡中发挥不同作用。
发育等生物学过程中发挥重要作用。前期研究发现, 绵羊NFIB基因存在3个转录异构体(transcript isoform), 分别编码3个不同的蛋白质异构体(protein isoform): NFIB-1(48 kDa)、NFIB-2(43 kDa) 和NFIB-3(39 kDa)。目前, 这些蛋白质异构体之间的功能差异还不清楚。为此, 该研究分别设计了羊NFIB基因转录异构体的特异性表达检测引物, 采用Real-time PCR开展NFIB基因3个转录异构体的组织表达谱分析; 分别构建NFIB基因的3个蛋白质异构体的真核表达载体, 转染HaCAT细胞, 采用CCK-8、Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒比较了这3个NFIB异构体对HaCAT细胞增殖和凋亡的影响。结果显示, NFIB基因3个转录异构体在绵羊的皮肤、脂肪、肾脏等多种组织和器官中表达, 但它们在不同组织和器官中的相对表达量不同。CCK-8细胞增殖分析显示, 与对照相比, NFIB-1具有促进HaCAT细胞增殖的作用(P<0.01), NFIB-2的作用不明显, 而NFIB-3显著抑制HaCAT细胞的增殖(P<0.01)。Cell Death Detection ELISA及Annexin V-FITC凋亡检测发现, 这3个蛋白质异构体在一定程度上均促进HaCAT细胞的凋亡, 其中, NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡的作用强于NFIB-2(P<0.01), 但NFIB-1和NFIB-3促细胞凋亡作用的差异不显著。这些结果表明, 羊NFIB的3个蛋白质异构体在细胞增殖和凋亡中发挥不同作用。
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