网状内皮增生症病毒感染改变外泌体蛋白质组成和免疫调节功能

摘要 : 采用间接免疫荧光、透射电镜观察、Western blot、质谱分析、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和流式细胞术分析技术检测了网状内皮增生症病毒(reticuloendotheliosis virus, REV)感染DF-1细胞的情况、感染细胞分泌外泌体(exosome)的形态大小、标志蛋白质水平以及REV对外泌体蛋白质组成和免疫功能的影响。结果显示, 接毒成功的DF-1细胞胞质中有明显的绿色荧光出现。提取的外泌体呈杯状, 平均直径大小在50~100 nm, 表达标志蛋白质Hsp70和Tsg101。与正常未感染细胞相比, REV感染细胞分泌的外泌体共存在58种表达水平差异的蛋白质。其中上调的46种, 包括REV的env蛋白gp90和gag-pol在内的4种蛋白质,下降的12种。这些外泌体同时具有明显的促进脾细胞分泌IL-10的作用; 对CD4+T和CD8+T细胞均具有明显的抑制性。REV感染改变了外泌体的蛋白质组成, 尤其是携带了REV的重要成分, 该成分与引起的外泌体抑制性免疫调节作用密切相关。