4个品系小鼠胚胎干细胞系的建立

摘要 : 探索高效的不同品系的小鼠胚胎干细胞的建系方法。B6D2F1 (C57BL/6×DBA/2)、 129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠， 孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin， PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin， HCG)促排， 3.5天交配后(days post coitus， dpc)冲洗子宫取囊胚， 或者2.5 dpc冲洗输卵管， 卵裂球体外培养获取囊胚。囊胚种植到小鼠成纤维细胞饲养层上干细胞培养液培养， 4~5天内细胞团扩增后玻璃毛细管挑出， 种植到新的饲养层上过夜再行胰蛋白酶消化， 3~4天传代一次。对所建立的小鼠ES细胞系进行形态学、染色体核型、AKP染色、体内外分化能力， 干细胞分子标记物荧光免疫染色等鉴定。获得10株小鼠胚胎干细胞，具有典型的胚胎干细胞生长特性，符合ES细胞的鉴定标准。结果表明成功的建立了来自B6D2F1(C57BL/6×DBA/2)、 129/SV×DBA/2、C57BL/6、BALB/C等4个不同品系小鼠的10株ES细胞系。内细胞团挑出过夜增殖后消化的培养方法可能有助于提高ES细胞的建系率。