应用小动物活体成像追踪观察EGFP标记的间充质干细胞

王伟^1# 陈超^1# 刘延明¹ 张男¹ 吕丽燕² 宋现让² 韩发彬^1*

¹聊城大学/聊城市人民医院干细胞与再生医学实验室, 聊城 252000;²山东省肿瘤医院放射肿瘤重点实验室, 济南 250117

摘要 : 为探讨干细胞移植治疗过程中干细胞在体内的存活和迁移能力, 利用非细胞损伤性的EGFP(enhanced green fluorescence protein)标记间充质干细胞进行了实验研究。该研究用电穿孔方法将加强的绿色荧光蛋白表达质粒pCMV-EGFP(cytomegalovirus-EGFP plasmid)转染细胞产生具有EGFP标记的牙髓干细胞、皮肤成纤维细胞(skin fibroblast cells, SFCs)和脐带间充质干细胞。将EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下, 用小动物活体成像系统观察了EGFP标记细胞在体内移植后细胞存活能力和荧光强度随时间的变化情况。结果表明, 电穿孔转染能够在体外产生高效表达EGFP的标记细胞, EGFP在牙髓干细胞、SFCs和脐带间充质干细胞中的表达率分别为80%、85%和80%。通过小动物活体成像系统检测表明, EGFP标记的脐带间充质干细胞注射到裸鼠皮下后EGFP荧光表达在7 d后逐渐下降, 但免疫组化分析表明, 移植细胞可存活6个月以上。该研究提示, EGFP标记的干细胞可用于体内追踪其存活、迁移及分化, 为探讨干细胞移植治疗作用提供了实验证据。