阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤干细胞的分离培养及鉴定

摘要 : 该研究旨在体外分离培养和鉴定阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤干细胞, 为绒毛生长相关研究提供实验材料。以阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤为样本, 酶消化和IV型胶原黏附法获得较纯的皮肤干细胞。通过形态学观察、生长曲线、细胞免疫组化、实时定量PCR和体外分化等方法探讨皮肤干细胞体外培养方法和生物学特性。结果发现, 皮肤干细胞形态较小, 铺路状生长, 折光度高且黏附能力强, 在体外培养至20代未出现明显细胞形态变化。免疫组化染色显示, 胎儿皮肤干细胞阳性表达Krt15、CD34和Itgβ1。Krt15、CD34和Itgβ1 mRNA相对水平分别为绒山羊角质细胞的5.56、24.37和7.22倍(P<0.01)。体外成骨诱导Von Kossa染色呈阳性; 成软骨诱导阿尔新蓝染色呈阳性; 成肌诱导后, Hoechst 33342染色观察到细胞融合的发生, MyoG免疫组化染色呈阳性。结果表明, 成功建立了阿尔巴斯绒山羊胎儿皮肤干细胞系。