PRMT5对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

张尤历¹ 葛璐¹ 陆瑛¹ 胡昌龙¹ 张行行¹ 彭琬昕² 何俊波¹ 龚爱华^2,3 徐岷^1*

¹江苏大学附属医院, 镇江 212000; ²癌基因及相关基因国家重点实验室, 镇江 212000;³江苏大学医学院基础医学系, 镇江 212000

摘要 : 该文目的为探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltranserase 5,PRMT5)对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。设计PRMT5短发夹核糖核酸(shRNA)序列, 装入pLKO.1-TRC vector质粒, 进行慢病毒包装, 感染肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402, 嘌呤霉素筛选并培养稳定低表达PRMT5细胞株。Western blot、qPCR检测shRNA干扰效率; CCK-8检测细胞增殖活性;平板克隆法检测细胞克隆形成能力; 流式细胞术检测细胞凋亡; Western blot检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的影响。结果显示, 成功构建慢病毒重组质粒sh-PRMT5并感染肝癌细胞。Western blot、qPCR结果表明, 筛选出的稳转细胞株能低表达PRMT5; 在肝癌细胞中下调PRMT5的表达, 可抑制细胞增殖(P<0.05), 降低cyclin B1、cyclin D1、cdc20和cdc25B蛋白质水平(P<0.05), 降低细胞克隆形成能力(P<0.05), 促进细胞凋亡(P<0.05), 同时能诱导Caspase-3表达, 降低Bcl-2/Bax的比值(P<0.05)。由此说明, 下调PRMT5的表达能抑制肝癌细胞增殖, 诱导细胞凋亡, 为进一步研究体内PRMT5的作用提供基础。