人前列腺癌PC3细胞Bloom解旋酶基因干扰载体的构建

罗霂榃^1,2 许厚强^2* 刘忠伟^2,3 段志强² 赵佳福^1,2 吴萍¹ 陈福¹

¹贵州大学生命科学学院, 贵阳 550025;
²贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室,贵阳 550025;
³贵州大学农学院, 贵阳 550025

摘要 : 通过RNAi技术干扰人前列腺癌PC3细胞Bloom(BLM)解旋酶基因的表达。实验前期根据BLM解旋酶基因序列设计并合成两对shRNA, 插入到CMV-copGFP-T2A-Puro-H1-mcs载体, 构建针对BLM解旋酶基因的重组干扰载体CMV-copGFP-T2A-Puro-H1-mcs-BLM1、CMV-copGFPT2A-Puro-H1-mcs-BLM2。经测序载体构建成功后，用脂质体将所构建的载体及阴性对照载体转染前列腺癌PC3细胞, 通过荧光定量PCR和Western blot检测转染细胞的BLM解旋酶表达情况。检测结果显示, 成功构建了BLM解旋酶RNAi真核表达载体; 利用脂质体转染PC3细胞后, 荧光定量PCR和Western blot鉴定结果表明, BLM解旋酶的表达水平显著降低, 即Bloom RNAi真核表达载体在mRNA和蛋白质水平阻断了BLM解旋酶的表达。