Dual-RMCE介导的T细胞受体基因置换系统的建立

龚英¹ 黄乙涓¹ 刘泽龙¹ 成凉¹ 彭晋¹ 刘建中¹ 李亮平^1,2*

¹中山大学中山医学院, 广州 510080;
²暨南大学第一附属医院, 广州 510630

摘要 : 抗肿瘤T细胞受体(T cell receptor, TCR)基因治疗在临床上已获得了巨大进展, 但仍然存在一些技术瓶颈。例如, 内外源性TCR链随机组合形成自身反应性TCR分子、外源基因随机插入导致抑癌基因灭活等。为解决这些问题, 作者提出建立低/单拷贝TCR基因置换技术: 即结合逆转录病毒和重组酶介导的盒式交换(recombinase mediated cassette exchange, RMCE)技术, 实现TCR基因定点置换以构建TCR稳定表达系统。首先, 通过逆转录病毒转导在16.113和Jurkat76细胞引入了含有loxP和FRT位点的EGFP(enhanced green fluorescent protein)基因; 然后, 利用RMCE方法将EGFP置换成MAGE-A1的TCRαβ基因, 置换效率高达5%。在Jurkat76细胞表面检测到了TCR和CD3分子, 并能与MAGE-A1特异性HLA-A2多聚体结合。预计利用这一TCR基因置换系统结合干细胞技术可快速产生抗原特异性的T细胞, 为TCR-T细胞治疗的安全应用提供一个新策略。