利用CRISPR/Cas9技术构建CreERT2定点敲入Isl1基因小鼠模型及分析

周云鹤^1,2 顾晓雯¹ 杨桦¹ 黄丹丹¹ 费俭^1,3*

¹同济大学生命科学与技术学院, 上海 200092; ²同济大学体育教学部, 上海 200092;³上海南方模式生物研究中心, 上海 200092

摘要 : 心肌祖细胞增殖和分化是心脏损伤后修复再生的基础, 而Isl1被认为是心肌祖细胞的特异性标志。为了研究以及示踪Isl1+心肌祖细胞及其分化后代, 该文尝试利用成簇规律间隔短回文重复序列CRISPR/Cas9系统, 将CreERT2定点插入到小鼠Isl1内源基因启动子之后, 建立了CreERT2基因敲入小鼠模型。通过与Rosa26-loxP-neo-loxP-lacZ小鼠(Rosa26-lacZ+)交配, 获得Isl1-CreERT(KI)/Rosa26-lacZ+双杂合小鼠。经过基因型鉴定、组织表达谱测定和X-gal染色、冰冻切片和石蜡切片等方法, 确认基因敲入小鼠的CreERT2表达在成年小鼠心脏窦房结、心脏神经节、主动脉弓和肺动脉根部, 与文献报道的Isl1表达部位相同。该研究建立的模型可为研究心肌祖细胞的增殖和谱系示踪提供重要的模型。