EGFP-LC3稳定细胞系的建立及对Aβ自噬效应的研究

摘要 : 该文建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系, 以10 μmol/L的Aβ肽及其不同疏水性氨基酸含量的截短形式处理细胞24 h, 计数LC3的荧光斑点数; Western blot检测LC3B表达量的变化; MTT检测特定Aβ诱导细胞自噬后对细胞活性的差异; 用透射电镜确认自噬体的细胞超微结构。结果显示, G418(700 μg/mL)筛选6周后, 建立了稳定表达EGFP-LC3的HEK293细胞系; Aβ25-35、Aβ40和Aβ42诱导细胞内LC3荧光斑点的效果较明显; Western blot结果显示LC3B的酯化, 即LC3BI向LC3BII转变; MTT检测发现, 与Aβ40相比, Aβ42处理后伴随自噬的细胞毒性更强; 电镜可以见到Aβ诱导的自噬小体。提示, Aβ肽及其截短的疏水性片段均可诱导自噬, 且诱导自噬的效果与疏水性氨基酸含量无关; 同时, Aβ42细胞损伤强于Aβ40。该研究为进一步探讨AD自噬机制提供了实验基础。