利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系

卢利莎¹ 白杨² 刘鑫² 王洪涛² 高洁² 杨亦青^2,3 苏培² 刘翠翠² 王钰² 张磊升² 熊涛^1* 周家喜^2*

¹长江大学生命科学学院, 荆州 434025; ²中国医学科学院, 北京协和医学院血液病医院(血液学研究所), 实验血液学国家重点实验室, 天津 300020; ³河北北方学院医学检验学院, 张家口 075000

摘要 : CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术, 利用人工设计的向导RNA(singleguideRNA, sgRNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割, 切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复, 从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族, 研究发现, MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展, 但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域, 设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sgRNA, 通过SURVEYOR分析及Western blot检测, 确认了所设计sgRNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后, 通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述, 该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株, 为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。