Egr-1对APP基因表达的调控作用

马琳^1# 周瑜^2# 李永玲² 柴娟¹ 贾中发² 郭克² 孙涛¹ 崔建奇^1*

¹宁夏颅脑疾病重点实验室, 省部共建国家重点实验室培育基地, 银川 750004; ²宁夏医科大学基础医学院, 银川 750004

摘要 : 该研究构建了含有APP启动子的荧光素酶报告质粒以及缺失突变的报告质粒, 将该质粒与Egr-1真核表达载体pCDNA3-Egr-1共转染到HEK293与U87MG细胞中进行荧光素酶活性测定, 以确定Egr-1对APP基因表达的调控作用。通过染色质免疫共沉淀实验(chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)和凝胶电泳迁移实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)确定Egr-1蛋白在APP启动子上的结合部位, 同时利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA(trichostatin A)和butyrate诱导内源性Egr-1的表达以及Egr-1抑制剂suramin来作用于细胞, 通过蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测Egr-1对APP蛋白表达的作用。结果显示, Egr-1蛋白在APP基因启动子上5′UTR区域有特异性的结合部位, 去除该结合部位则Egr-1失去对APP基因启动子的调控作用, ChIP和EMSA的结果也证实了该结合位点; 通过HDAC抑制剂和suramin干扰内源性Egr-1的表达则显著影响了Egr-1对APP基因表达的调控作用。