运用改良的CRISPR/Cas9系统建立HtrA2敲除细胞株

摘要 : 能识别特定基因组DNA序列的核酸酶是基因编辑的重要工具。在单链RNA引导下,来源于一种产脓链球菌的成簇规律间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeats, CRISPR)关联蛋白(CRISPR-associated protein 9, Cas9)能够发挥其核酸酶功能对基因组特定序列进行剪切。这种功能依赖于单链引导RNA(single-guide RNAs, sgRNAs或gRNAs)中20 nt的核心靶向序列。在该研究中, 作者对已有的CRISPR/Cas9系统载体进行了优化, 简化了gRNA表达载体的构建。运用优化后的CRISPR/Cas9系统, 我们敲除了HEK293T细胞中HtrA2基因的第一个外显子。这一改进大幅度降低了CRISPR/Cas9技术的使用成本。