花生四烯酸细胞色素P450表氧化酶对凋亡内皮细胞Bcl-2表达、Caspase-3及MAPK活性的影响

摘要 : 花生四烯酸经细胞色素P450表氧化酶代谢产生的内皮来源超极化因子(EDHF)[表氧化二十烷烯酸(EETs)]对内皮细胞具有保护作用。研究了转染细胞色素P450表氧化酶基因CYPBM₃·F87V、CYP2C11OR及CYP2J2产生内源性EETs， 通过检测内皮细胞中Bcl-2表达、caspase-3的活性及MAPK磷酸化水平探讨内源性EDHF的内皮细胞保护效应及其抗TNF-α诱导内皮细胞凋亡的作用机制。原代培养的牛主动脉血管内皮细胞转染CYP450表氧化酶基因24 h后， 加入TNF-α作用一定时间诱导内皮细胞凋亡， 用Western印迹方法检测Bcl-2的表达， MAPK磷酸化水平， 同时测定caspase-3的活性。结果显示转染表氧化酶基因能抑制TNF-α诱导的时间依赖性Bcl-2下调， 抑制Caspase-3的激活。TNF-α使细胞内磷酸化MAPK水平呈时间依赖性减低， 转染表氧化酶基因后细胞内的磷酸化MAPK水平较对照组升高。因此， 转染表氧化酶基因CYPBM₃·F87V、CYP2C11OR以及CYP2J2使内皮细胞产生内源性EETs (EDHF)通过激活MAPK (ERK1/2)途径， 抑制抗凋亡基因Bcl-2的降解， 抑制caspase-3的激活， 从而抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡， 因而具有内皮保护效应。